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灵芝川芎合剂对下肢ASO的治疗效果

作者:2018-11-06 01:00阅读:文章来源:未知

  摘要:目的 探讨定位性动脉粥样硬化闭塞症模型制作的新方法, 并研究灵芝川芎合剂对下肢动脉粥样硬化闭塞症模型兔的治疗效果。方法 将新西兰大白兔随机分成空白组、模型组、治疗组和立普妥组 (阳性对照) , 每组10只。采用高脂喂养与动脉注射聚桂醇泡沫硬化剂相结合的方法, 建立下肢定位性动脉粥样硬化闭塞症模型, 造模6周后给予相应治疗;治疗组采用灵芝 (0.5 g/kg) 及川芎 (0.5 g/kg) 合剂煎水灌胃, 1次/d, 治疗4周;立普妥组给予立普妥0.2 mg/kg灌胃, 1次/d, 治疗4周;空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃。治疗4周后, 对兔下肢进行造影, 取血测定血清中总胆固醇 (TC) 、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) 和低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C) 水平, 取术侧髂股动脉进行苏木素伊红 (HE) 染色和EVG染色。结果 与空白组比较, 模型组TC和LDL-C水平显着升高 (P<0.05) , HDL-C水平显着降低 (P<0.05) ;与模型组比较, 治疗组和立普妥组TC和LDL-C水平显着降低 (P<0.05) , HDL-C显着升高 (P<0.05) 。病理检查结果显示模型组有显着的动脉粥样硬化特征, 且血管内膜弹性纤维显着缺失, 而治疗组和立普妥组的动脉粥样硬化特征和膜弹性纤维情况较模型组有明显改善。结论 高脂喂养与动脉注射聚桂醇泡沫硬化剂相结合的方法可成功构建下肢动脉粥样硬化闭塞症模型。灵芝川芎合剂对下肢动脉粥样硬化闭塞症模型兔有较好的治疗效果。

  关键词:灵芝; 川芎; 动脉粥样硬化闭塞症; 聚桂醇; 髂股动脉;

  Abstract:Objective To establish a new focal atherosclerosis obliterans model and to study the therapeutic effect of Ganoderma lucidum combined with Chuanxiong on lower extremity atherosclerosis obliterans in rabbits.Methods New Zealand white rabbits were randomly divided into control group (n= 10) , model group (n= 10) , treatment group (n=10) and Lipitor group (positive control, n= 10) . The lower extremity atherosclerosis obliterans model was established by high-fat diet combined with artery injected with lauromacrogol. After 6 weeks of modeling, the rabbits were given with appropriate treatment for 4 weeks. After treatment, iliac artery quantitative angiography was performed, and blood samples were collected to detect the level of total cholesterol (TC) , low-density lipoprotein cholestrol (LDL-C) and high-density lipoprotein cholestrol (HDL-C) . The histopathologic changes were observed using HE staining and EVG staining.Results Compared with the blank group, the level of TC and LDL-C in the model group were significantly increased (P< 0. 05) , and the level of HDL-C was significantly reduced (P< 0. 05) . Compared with the model group, the levels of TC and LDL-C in the treatment group and the Lipitor group were significantly reduced (P< 0. 05) , while the levels of HDL-C were significantly increased (P< 0. 05) . The results of pathological observation showed that the model group had significant atherosclerosis and loss of elastic fibers in endangium, while the changes in the treatment group and the Lipitor group were significantly improved compared with the model group.Conclusion The lower extremity atherosclerosis obliterans model is successfully established by high-fat diet combined with artery injected with lauromacrogol. Ganoderma lucidum combined with chuanxiong has a good effect on treatment of lower extremity atherosclerosis obliterans.

  Keyword:ganoderma lucidum; chuanxiong; atherosclerosis obliterans; lauromacrogol; arteria iliacofemoralis;

  下肢动脉粥样硬化闭塞症 (arteriosclerosis oblit-erans, ASO) 是由于动脉粥样硬化斑块的形成与堆积, 导致动脉血管狭窄、闭塞, 进而导致肢体慢性缺血的一种动脉粥样硬化 (AS) 并发症[1]。作为AS患者全身表现的一部分, ASO危害极大且防治现状并不乐观[2]。目前其治疗方案繁多, 但远期疗效欠理想, 仍伴随有较高截肢率和病死率。中医中药治疗和预防ASO一直以来都是我国医药工作者一直努力的研究方向。灵芝始载于《神农本草经》, 属灵芝属, 是我国名贵中药草。灵芝中含有多糖、三萜、生物碱等活性成分[3]。有研究表明[4,5,6,7], 灵芝具有降低胆固醇、三酰甘油的功效, 且具有抗氧化, 清除氧自由基, 抑制低密度脂蛋白氧化, 保护血管内皮细胞的功能。另外, 川芎属藁本属, 阿米芹族, 具有活血行气的功效, 上行可入巅顶, 下行可达血海, 其活血化瘀作用效果明显。基于灵芝和川芎药效功能, 2016年11月至2017年12月, 本研究尝试采用高脂喂养与动脉注射聚桂醇泡沫硬化剂相结合的方法, 建立下肢定位性ASO动物模型, 并探讨灵芝川芎合剂对下肢ASO的治疗效果, 为ASO模型的制作提供简单易行的建模方法, 也为灵芝川芎合剂治疗ASO提供理论基础。

  1 材料与方法

  1.1 主要实验药物与仪器

  灵芝、川芎中药材由三九药业集团提供;阿托伐他汀钙片由辉瑞制药有限公司提供, 国药准字H20051407;总胆固醇 (TC) 、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) 、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C) 测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供;微型高速离心机 (型号:C2500-R-230V) 购自美国Labnet公司;全自动生化免疫分析仪 (型号:Multiskan MK3) 购自美国Thermo scientific公司。

  1.2实验动物

  健康纯种的新西兰大白兔40只, 雌雄不限, 5~6月龄, 体重2.5~3.5 kg, 购自华中农业大学实验动物中心, 动物合格证编号:SCXK (鄂) 2016-0018。

  1.3 动物造模及分组

  造模前以基础饲料适应性单笼喂养1周, 排除自由饮食异常者。适应性喂养1周后, 将大白兔随机分成空白组、模型组、治疗组和立普妥组, 每组10只, 共40只。空白组喂养普通饲料, 自由饮水;其他各组喂养高脂饲料 (含1%胆固醇, 6%猪油, 93%普通饲料) , 100 g/d, 自由饮水, 继续喂养2周。第3周除空白组外其他各组均按以下方法建立定位性下肢ASO模型:3%戊巴比妥钠1 mL/kg经耳缘静脉注射麻醉, 固定四肢及头部, 双下肢内侧剪毛, 常规消毒皮肤, 沿股动脉走行方向纵行切开皮肤, 游离出股动脉, 无损血管阻断钳夹闭左股浅动脉近端 (图1-A) , 2 mL注射器穿刺股动脉将聚桂醇泡沫 (聚桂醇∶空气=1∶1) 以1 mL注射量注入股动脉远端 (图1-B) , 保留10 min后开放阻断钳, 局部压迫止血后, 缝合皮肤。右侧股浅动脉作为对照侧注射生理盐水。术后每只给予青霉素80万U, 连续3 d。继续上述饲料喂养6周。

  图1 兔下肢ASO模型建立过程

  

  1.4 药物治疗

  在第10周各组兔开始全部喂食普通饲料并且开始给予药物治疗。治疗组采用灵芝 (0.5 g/kg) 及川芎 (0.5 g/kg) 合剂煎水灌胃, 1次/d, 治疗4周;立普妥组给予立普妥0.2 mg/kg灌胃, 1次/d, 治疗4周;空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃。

  1.5 髂股动脉粥样硬化闭塞程度检测

  治疗周期结束后, 3%戊巴比妥钠从兔耳缘静脉注射麻醉后, 颈前正中术野剪毛, 常规消毒皮肤, 沿正中纵行切开皮肤及皮下组织, 钝性分离右颈总动脉上段, 逆行插入0.35 mm的导引钢丝, 在1 000 mA血管数字减影机X线透视下, 送至腹主动脉下段, 顺导引钢丝引入4 F造影导管至腹降主动脉分叉上方, 撤出导引钢丝, 经导管注入肝素300 U后, 快速注入38%泛影葡胺5 mL, 造影机摄像。

  1.6 病理标本留取及相关指标检测

  造影后经兔耳缘静脉缓慢静脉滴注生理盐水20 mL, 30 min后, 沿双侧股动脉走形切开皮肤, 暴露股动脉, 抽取血液标本5 mL, 2 500 r/min离心10 min, 取上层血清, 采用全自动生化免疫分析仪分别检测TC、HDL-C和LDL-C。然后各取股浅动脉1 cm进行组织处理, 石蜡包埋, 间断均匀切片5张, 切片厚度5μm, 分别制作苏木素伊红 (HE) 染色, EVG染色, 观察动脉血管形态学变化。

  1.7 统计学方法

  采用SPSS 19.0统计软件, 计量资料以表示, 组间比较采用t检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。

  2 结果

  2.1 对模型兔脂质水平的影响

  与空白组比较, 模型组TC和LDL-C水平显着升高 (P<0.05) ;与空白组比较, 模型组HDL-C水平显着降低 (P<0.05) 。与模型组比较, 治疗组和立普妥组TC和LDL-C水平显着降低 (P<0.05) , HDL-C显着升高 (P<0.05) 。见表1。

  *与空白组比较P<0.05;△与模型组比较P<0.05
 

  2.2 影像学观察兔后肢髂股动脉闭塞情况

  治疗后对兔后肢双侧髂股动脉进行血管造影可见, 空白组兔后肢左侧髂股动脉均通畅, 管壁光滑, 无狭窄;模型组兔后肢左侧髂股动脉均可见管壁欠光滑, 显狭窄, 欠通畅, 远端血管显影欠佳, 侧支循环少;治疗组和立普妥组后肢左侧髂股动脉狭窄程度均明显轻于模型组, 远端血管显影明显较模型组清楚, 侧支循环较模型组多。见图2。

  图2 兔下肢双侧数字减影血管造影

  

  2.3 组织病理观察兔后肢髂股动脉变化情况

  HE染色结果可见, 空白组兔后肢左侧髂股动脉层次清晰, 内膜较薄, 无脂肪物质沉积, 无动脉粥样硬化斑块形成;模型组股动脉内膜明显增厚, 可见脂质斑块, 管腔严重狭窄, 血管堵塞严重;治疗组动脉内膜增厚, 管腔狭窄程度小于模型组, 内膜管壁无脂肪物质沉积;立普妥组内膜增厚, 厚薄不均, 管腔狭窄程度显着小于治疗组, 无脂肪物质沉积。见图3。

  图3 兔后肢左侧髂股动脉变化情况 (HE, ×100)

  

  空白对照组后肢左侧髂股动脉内膜呈现高度的黑色着色, 模型组髂股动脉血管内膜黑色着色较浅, 治疗组髂股动脉血管内膜黑色着色较模型组深, 立普妥组髂股动脉血管内膜黑色着色较模型组深, 但浅于治疗组。见图4。

  图4 兔后肢左侧髂股动脉血管壁弹性纤维变化情况 (EVG, ×100)

  

  3 讨论

  ASO是一种常见的慢性肢体缺血性血管外科疾病, 多发于下肢, 治疗较困难。有研究表明[8], 血管内皮损伤是导致AS向ASO转化的始动环节。在对ASO研究的过程中, 人们尝试了多种复制ASO模型的办法。目前, 在高脂血症基础上复制ASO模型的方法主要两类: (1) 动脉结扎法[9], 其主要为急性缺血模型, 缺乏慢性闭塞的生理学特点; (2) 机械损伤法, 如球囊法[10]、辐射损伤法[11]、空气干燥法[12]等。然而, 人类下肢动脉粥样硬化闭塞症多累及整个下肢动脉, 以上方法均具有模型病变范围局限, 且操作复杂, 实验成本较高等不足。因此, 寻找制作简单易行且可推广至下肢其他部位动脉硬化定位模型的方法意义重大。

  聚桂醇为聚氧乙烯月桂醇醚, 是一种泡沫硬化剂, 与空气混合时可产生大量泡沫, 其可造成血管内皮损伤, 使局部形成血栓, 阻塞血管[13]。本研究尝试采用高脂喂养与动脉注射聚桂醇泡沫硬化剂相结合的方法, 建立下肢定位性动脉粥样硬化闭塞症动物模型。实验结果显示, 与空白组比较, 模型组TC和LDL-C水平显着升高 (P<0.05) , HDL-C水平显着降低 (P<0.05) , 说明高脂喂养可使模型组兔产生高脂血症。在此基础上病理研究结果显示, 与空白组比较, 模型组兔股动脉内膜明显增厚, 管腔严重狭窄, 血管堵塞严重、可见脂质斑块以及血管内膜弹性纤维显着减少。说明高脂喂养联合动脉注射聚桂醇泡沫硬化剂制作ASO模型非常成功, 且具有可靠性强, 可重复性高的特点。与其他方法比较, 该方法具有操作简单、成本低, 动脉粥样硬化闭塞可遍布下肢其他部位等优点, 可以用于复制ASO动物模型。

  祖国医学对ASO早有论述, 并把其归于“瘀阻”、“脉痹”、“无脉证”、“血瘀证”等范畴, 认为下肢ASO的病位在脉, 正气亏虚为本, 痰饮、湿浊、瘀血阻滞为标。本研究采用两种中药材灵芝与川芎的合剂治疗ASO模型兔, 并采用具有显着降血脂作用的西药立普妥作为治疗组的阳性对照。结果显示, 与模型组比较, 治疗组和立普妥组TC和LDL-C水平显着降低 (P<0.05) , HDL-C显着升高 (P>0.05) 。有研究显示[14], TC、LDL-C水平过高是AS的危险因子, 并且LDL-C是致AS的基本因素。说明, 灵芝川芎合剂可以降低ASO模型兔体内的血脂质含量, 具有降血脂的作用。衣艳君等[15]研究显示灵芝可显着降低大鼠血清中TG、TC和LDL-C含量。与本研究结果相符合, 进一步证实灵芝具有降血脂的作用。动脉血管病理染色结果显示, 模型组兔股动脉有显着的AS病理特征, 并且血管内膜膜弹性纤维显着减少, 而治疗组与立普妥组兔AS病理特征显着轻于模型组。说明, 灵芝川芎合剂可以显着改善兔ASO症状。王浩然等[16]研究显示川芎可显着提高ApoE-/-小鼠体内HDL-C水平, 减少动脉斑块的形成, 对AS有显着的抑制作用。提示, 灵芝川芎合剂可用于ASO的治疗。

  综上所述, 采用高脂喂养联合动脉注射聚桂醇泡沫硬化剂制作ASO模型是可行和实用的, 可为今后下肢ASO的治疗研究提供更好的动物模型。中药材灵芝川芎合剂对ASO的治疗具有一定的疗效, 且无不良反应, 临床上可采用灵芝川芎合剂用于ASO治疗和预防。

  参考文献

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