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浅析外侧缰核注射腺苷对正常大鼠镇痛的影响

作者:2017-06-03 18:13阅读:文章来源:未知
  腺苷(Ado)是腺苷一磷酸去磷酸后的产物,作为中枢神经系统(CNS)的一种神经调质,它可降低CNS 神经元的兴奋性,在中枢许多部位具有抑制作用。Ado 是由腺嘌呤的N-9 与D-核糖的C-1,通过β-N9-糖苷键构成的核苷。Ado 形成于胞内或者细胞膜表面,主要来自于胞内外核苷酸的分解。研究表明,Ado 在CNS 中直接或间接参与睡眠、机体防御、镇静及镇痛等作用。Ado 对大鼠内侧缰核(Hb) 神经元自发放电起抑制作用,对外侧Hb 神经元自发放电则有兴奋作用。Hb 是在镇痛作用中非常重要的核团,在大脑中作为边缘前脑到脑干背侧通路上一个重要枢纽,许多参与痛觉调节的部位都与Hb 有密切的关系,Hb 存在于脊椎动物的背侧间脑,可分为内侧MHb和外侧Hb(LHb),痛兴奋性和痛抑制性两类神经元在MHb和LHb 内对伤害性的刺激表现出不同的反应。而LHb 又作为边缘系统与中脑相同的枢纽,有痛的抑制性神经元。有关Ado 在LHb 内对大鼠痛觉调节的影响国内外尚未见报道。本实验分析Ado 参与LHb 对正常大鼠痛觉的调节作用,为揭示Ado 在CNS 内镇痛作用的机制提供新的位点,并为Ado 受体的临床应用提供依据。
  1 材料与方法
  1. 1 材料成年雄性Wistar 大鼠( 由吉林大学白求恩医学院动物中心提供) 12 只,体重180 ~ 210 g,实验期间进行分笼饲养,自由饮水与进食,并接受自然光照,饲养室温度维持在20℃ ~ 24℃。试剂药品有Ado(上海强耀生物科技公司提供)用生理盐水配置为0. 1、0. 5、1. 0、2. 0 nmol,医用酒精,H2O2,10%水合氯醛,亚甲基蓝,牙托粉和牙脱水等。实验器材为电子测压仪(LYS-3E),智能热板仪(YLS-6B),均由安徽淮北正华生物仪器设备有限公司生产,脑立体定位仪(由深圳瑞沃德公司生产,68001);体重测量仪,微量注射器,PE 连接管;手术器械等。1. 2 实验方法①实验准备:为了保证实验质量减小误差,需对大鼠进行前期的热板和压板训练,使大鼠的反应的潜伏期(HWL)维持在一个相对稳定的范围,依据孙衍刚等方法,训练7 d,每天3 轮,每轮3 次,使热板测试的反应时间在2 ~ 3 s,压力测试的反应时间在5~ 8 s。②核团的微量注射:用10%水合氯醛对大鼠进行腹腔麻醉,在用酒精消毒的条件下,将大鼠的头部水平固定在脑立体定位仪上,后将头骨暴露,参考Watson鼠图谱在LHb 定位,插入焊接好的不锈钢套管,并用牙托粉和牙托水固定,封住套管和颅骨之间的缝隙。术后让大鼠恢复2~ 3 d 后再进行1~ 2 d 的压板与热板的训练,开始行为痛觉的测试。Ado 需要低温保存,并现用现配,进行核团注射药物前需要保证套管的通畅,将注射器插入套管,缓慢注射药物,时间控制在90~ 120 s,每次注射后应该使注射针在套管中停留片刻取出。③行为痛觉的测试:注射药物前需要测量一轮大鼠的HWL 作为基础值,以注射药物后各时间点的HWL 与之对比出现变化的百分比作为结论分析的参考值。测量过程中为了避免对组织的损伤,设定的测定量都有一个极限值不可超过,在注射药物后特定时间点(5、10、20、30、45、60 min) 对大鼠的HWL 进行测量。④热板测试: 热板的温度控制在51. 8℃ ~52. 2℃,将大鼠待测的后爪紧贴于热板上,开始计时,待大鼠后爪感觉疼痛主动缩回时,测试计时结束。⑤压板测试:用压力测试仪对大鼠进行压力测试,同样将大鼠待测后爪放在趾压板上,接触面应在大鼠后爪的趾关节处,待大鼠感觉疼痛主动缩回时,停止压力计量。记录注射Ado 的和注射生理盐水对照组
  HWL。
  1. 3 统计学处理采用独立样本t 检验。
  2 结果
  LHb 内微量注射0. 1 nmol Ado 与对照组相比,左、右爪机于晓利等 外侧缰核注射腺苷对正常大鼠镇痛的影响 第 24 期 ·6097·械刺激的HWL 均有极显著差异(P<0. 001,P<0. 001),左、右爪热刺激的HWL 均无明显差异(P>0. 05,P>0. 05);0. 5 nmol Ado引起大鼠左、右爪机械刺激的HWL 均有极显著差异( P <0. 001,P<0. 001),左、右爪热刺激的HWL 均无明显差异(P>0. 05,P>0. 05);1. 0 nmol Ado 与对照组相比,左爪热刺激的HWL 有显著差异(P<0. 01),右爪热刺激的HWL 有差异(P<0. 05),左、右爪机械刺激的HWL 均有极显著差异(P<0. 001,P<0. 001) ;2. 0 nmol Ado 引起左、右爪热刺激和机械刺激的HWL 均有极显著差异( P< 0. 001,P< 0. 001)。不同浓度Ado在LHb 内对正常大鼠具有镇痛作用,这种镇痛作用具有一定的剂量依赖性和时间规律性。
  3 讨论
  Hb 位于边缘并作为中脑环路中一个重要的中转站,是多种生理功能的汇聚点,其神经元的电活动具有明显的昼夜节律性。Ado 是一种在体内广泛存在的神经调质,特别在中枢神经系统中发挥着重要的作用,并且在早期被证明在外周神经系统中Ado 通过不同受体介导,在痛觉传导通路中发挥着重要的作用。而Ado 的主要来源与ATP 密切相关。ATP 是广泛存在于周围和中枢神经系统的神经递质,与疼痛密切相关。在炎症反应及神经损伤时,ATP 作为一种疼痛介质激活感觉传入纤维。在外周组织中ATP 有神经元以及非神经元释放两种来源。有研究者把Ado 的相应受体(A1R,A2R,A3R) 放在外周痛觉信息调控中探究其作用,发现A1R 在术后,炎症等镇痛中具有重要的作用,其中对A2R 激动剂CGS61280 亲和力低的A2BR 有痛觉传导作用,其选择性拮抗剂与A1R 均可减少急性与炎症痛的相关行为,A3R 的激活具有促炎作用,可作为治疗炎症痛的新起点。最后证明了大鼠在Ado 释放相应增加时,受A1R 的影响,痛敏程度下降,且主要表现为脊髓水平上的镇痛。联系Ado 可增加LHb 神经元的放电,对LHb 神经元有兴奋作用,同时再与同样有研究表明的可卡因可直接对LHb 作用,可提高LHb 神经元的兴奋性,抑制其对痛的诱发反应这一结论相结合,得出在正常大鼠的LHb 中微量注射Ado对大鼠镇痛作用的可能机制是LHb 具有与痛觉相关的神经元,而Ado 可以增加LHb 内神经元的放电,提高神经元的兴奋性,结合Ado 中A1R 受体在疼痛中的镇痛调节作用,导致大鼠痛觉敏感程度下降从而起到镇痛作用。但是对于在痛觉调节中Ado促进释放的神经元和Ado 不同受体的结合和结合后与痛觉调节相作用具体的生理机制还有待于做进一步的研究。
 

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