Hi:欢迎来到中国论文网   登 陆 | 注 册
分享到:0

所有论文科目分类

中国论文网 > 免费论文 > 医学论文 > 药学 >

详谈黄连对P-糖蛋白介导的抗癫痫药的调节作用

作者:2015-08-03 11:14阅读:文章来源:未知

  癫痫是神经系统的常见疾病,我国的癫痫患者平均每年新增40 余万例,且18 岁以下患者高达75%~80%。临床采用的抗癫痫药物(antiepileptic drugs,AED)尽管对许多患者具有明显疗效,但仍有30%~40%癫痫患者经一定时期适当治疗后仍未达到无发作或长期用药后出现药物抵抗。国内外学者发现, P- 糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)与此相关,其可介导AED泵出脑组织或阻止AED 进入脑内,所以抑制P-gp的表达及功能是开发新型癫痫药物及治疗方法的新途径。但目前治疗癫痫的P-gp 抑制剂的研发主要集中于西药领域,如环孢素、PSC-833、VX-710等,由于这些药物存在不良反应大、选择性差或亲和力低等缺点,至今未被批准用于临床癫痫的治疗。中药因具有不良反应小、多靶点、多途径的综合调节作用等先天优势,成为开发的新契机。黄连(Coptidis Rhizoma,CR)是一种常用中药,有清热燥湿,泻火解毒之功效,研究发现其对P-gp有抑制作用,另有报道黄连温胆汤在小儿神经系统疾病中有清热化痰解郁,开窍宁神的作用,但尚无文献报道黄连联合抗癫痫药治疗癫痫的疗效以及黄连对P-gp 介导的抗癫痫药透过血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的影响。因此,本研究借助P-gp 抑制剂维拉帕米和常用抗癫痫药卡马西平,对上述内容展开研究,为临床癫痫病的治疗提供参考。

  1 材料

  1.1 药物

  黄连(福建同春医药有限公司中药分公司),经福建省中医药大学阮君山副教授鉴定为毛莨科植物黄连(Coptis chinensis Franch.)的干燥根茎;卡马西平对照品(中国药品生物制品检定所,纯度:98%,批号:0142-9503);卡马西平片(诺华制药,每片200 mg,批号:X0295);盐酸维拉帕米缓释片(江苏恒瑞制药有限公司,每片0.12 g,批号:100801);戊四唑(阿拉丁试剂公司,纯度:98%,批号:P103065);士的宁(中国药品生物制品检定所,纯度:98%,批号:100240-200702);乙腈、甲醇(国药集团化学试剂有限公司,色谱纯);0.9%NaCl 注射液(福州海王福药制药有限公司);实验用水均为重蒸水。

  1.2 仪器

  LC-20AD 高效液相色谱仪(日本岛津公司);TG16-WS 台式高速离心机(湘仪仪器厂);XW-80A涡旋混合器(上海医科大学仪器厂);AE-240 电子分析天平(美国梅特勒公司)。

  1.3 动物

  KM 小鼠,清洁级,♂,(18±2)g,购自福建省医学科学研究院吴氏实验动物中心,生产许可证号:SYXK(闽)2011-0002。

  2 方法

  2.1 药液制备

  戊四唑、士的宁使用前用生理盐水分别配置成为8,0.1 mg·mL1 的溶液,4 ℃冷藏;称取黄连2 g 于50 mL 烧杯中,加10 倍量水浸泡0.5 h,煎煮0.5 h,四层纱布过滤,滤渣再用10 倍量水煎煮0.5 h,四层纱布过滤,合并2 次滤液,水浴浓缩得生药浓度为0.2 g·mL1 的黄连水煎剂。卡马西平和维拉帕米用生理盐水分别配置成为8 ,4 mg·mL1 的混悬液,用前配置并摇匀使用。

  2.2 戊四唑造模及处理

  小鼠50 只随机分为模型组、高、中、低剂量联用组(黄连高、中、低剂量联用卡马西平)和卡马西平组,每组10 只。黄连的高、中、低剂量参考黄连毒性研究中小鼠的半数致死量(LD50)[12],分别为LD50 的1/10、1/20 和1/40。具体按表1 剂量灌胃给药,模型组给予等体积生理盐水,给药后30 min,腹腔注射戊四唑95 mg·kg1,观察小鼠的发作情况。

  2.3 士的宁造模及处理

  取健康小鼠50 只,随机分为模型组、高、中、低剂量联用组(黄连高、中、低剂量联用卡马西平)和卡马西平组,每组10 只。按表2 剂量灌胃给药,模型组给予等体积生理盐水,灌胃后30 min 腹腔注射士的宁1.25 mg·kg1,观察小鼠的发作状态。

  2.4 痫性发作分级及观察

  采用Racine 标准[13],即0 级:无发作反应;1级:节律性口角、耳或面部肌肉抽动阵挛;2 级:点头并伴随更严重的面部肌肉抽动阵挛;3 级:出现前肢阵挛但不伴随直立;4 级:前肢阵挛伴随直立;5 级:全身强直阵挛发作而跌倒。连续观察30 min,记录各组小鼠给药后的行为学变化。

  2.5 黄连对卡马西平透过BBB 的影响

  2.5.1 分组与给药 小鼠30 只随机分为阴性对照组、黄连组和阳性对照组,每组10 只。黄连组按黄连0.07 mg·g1·d1 和卡马西平0.1 mg·g1·d1 的剂量灌胃;阳性对照组按同剂量卡马西平及维拉帕米42 mg·kg1·d1 灌胃;阴性对照组用同剂量的卡马西平和生理盐水灌胃。实验期间各组小鼠置于安静环境分笼饲养,自由摄食饮水,每天根据小鼠体质量调整剂量,于9∶00 给药,连续灌胃5 d。第6 天8∶55,将小鼠颈椎脱臼处死,在冰块上取出脑组织。

  2.5.2 色谱条件 色谱柱为Inertsil ODS-SP(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水(40∶60);流速为1.0 mL·min1;柱温为30 ℃;检测波长为235 nm。

  2.5.3 样品处理 取小鼠脑组织,用生理盐水冲洗脑组织表面的血。将脑组织样品保存于20 ℃冰箱中;室温融化,称重,置于研钵中,加入1 g∶1.5 mL 生理盐水,研磨为匀浆液,5 000 r·min1离心10 min。取上清液100 μL,加入乙腈200 μL,黄连(Coptidis Rhizoma,CR)是一种常用中药,有清热燥湿,泻火解毒之功效,研究发现其对P-gp有抑制作用[8-9],另有报道黄连温胆汤在小儿神经系统疾病中有清热化痰解郁,开窍宁神的作用[10],但尚无文献报道黄连联合抗癫痫药治疗癫痫的疗效以及黄连对P-gp 介导的抗癫痫药透过血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的影响。因此,本研究借助P-gp 抑制剂维拉帕米[11]和常用抗癫痫药卡马西平,对上述内容展开研究,为临床癫痫病的治疗提供参考。

  2.6 统计学处理

  采用SPSS 13.0 软件处理实验所得数据,计量资料用x  s表示,潜伏期的比较采用方差分析,惊厥率和死亡率的比较用2 检验,脑浓度的比较采用t 检验,P<0.05 为差异有统计学意义。

  3 结果

  3.1 黄连对戊四唑小鼠的影响

  卡马西平单用或联用黄连低、中、高剂量各组小鼠的惊厥潜伏期均显著增长,惊厥率和死亡率显著降低。但联用与单用卡马西平相比,可以更为明显地延长惊厥潜伏期,且黄连高剂量可明显减少惊厥率,差异具有统计学意义。

  3.2 黄连对士的宁小鼠的影响

  与模型组比较,卡马西平单用或联用低、中、高剂量的黄连均可显著对抗士的宁诱发的小鼠发作,单用卡马西平可使潜伏期明显延长,但惊厥率无统计学差异,卡马西平联用黄连的作用优于单用卡马西平,能显著延长潜伏期和减少小鼠惊厥的发作率,差异具有统计学意义。卡马西平单用或联用低、中、高剂量的黄连都可以明显降低死亡率,但单用或联用间无显著性差异。

  3.3 黄连对卡马西平透过BBB 的影响

  黄连组和阳性对照组的卡马西平脑浓度均明显大于阴性对照组,但黄连组的浓度低于阳性对照组,提示黄连可显著提高卡马西平的BBB 透过率,但作用较维拉帕米弱。

  4 讨论

  抗癫痫药物的设计和开发必须利用动物癫痫模型,实验性癫痫动物模型与人类癫痫发作存在有相似性,其机制也接近人类发作时的病理生理状态。一般认为,戊四唑主要作用于脑干和大脑,是癫痫小发作常用模型;士的宁模型常被认为是顽固性癫痫的良好模型。本研究选用这2 种模型,从不同侧面对黄连的抗癫痫能力进行研究,发现黄连可显著增强卡马西平对抗戊四唑、士的宁的作用,明显改善潜伏期和惊厥率,说明黄连确实对癫痫有一定的防治作用,能显著增强抗癫痫药的效果。

  临床上常见许多癫痫患者血药浓度稳定,达到有效治疗浓度范围,但癫痫控制不良。研究表明,这与抗癫痫药物通过BBB 的量减少导致中枢神经系统内药物浓度低于有效浓度有关,所以提高卡马西平等抗癫痫药在中枢神经系统内的含量将有助于增强其抗癫痫疗效。P-gp 是一种能限制抗癫痫药物透过BBB 的多药耐药转运体,大量研究发现在难治性癫痫患者和动物模型脑组织中P-gp 表达水平较正常脑组织明显增高,因此通过抑制P-gp 可以增加脑组织对药物的吸收,这种增强药物渗透入脑的策略也许可以为逆转难治性癫痫的耐药性提供一个新的治疗方向。本实验将黄连和卡马西平联合给药,发现黄连可显著提高卡马西平的脑浓度,尽管结果显示黄连的作用较维拉帕米弱,但这可能与两因素相关:①黄连剂量,由于戊四唑和士的宁的药理实验中,黄连低、中、高剂量间的潜伏期、惊厥率和死亡率无显著性差异,无明显量效关系,所以脑浓度影响实验中采用低剂量黄连;②实验动物脑组织中的P-gp水平,本实验是将正常小鼠分组灌胃后初步研究黄连对P-gp 介导的抗癫痫药脑转运的影响,而癫痫小鼠脑组织中P-gp 水平较正常小鼠有大幅提高,黄连抵抗脑组织P-gp 外排癫痫药物的作用可得到进一步体现。目前本研究小组正在研究更高剂量的黄连对癫痫动物P-gp 的抑制和抗癫痫药脑浓度的增加作用并将做后续报道,黄连可能等效于甚至超过维拉帕米的作用。

  在卡马西平脑浓度的测定实验中,根据临床治疗药物监测的原理,连续多次给药达稳态后,最后1 次用药前即刻取样测定谷浓度,结果较为稳定且个体差异小,可信度高,所以本研究采用稳态谷浓度为切入点。据文献报道,卡马西平在小鼠脑组织的半衰期为2.48 h,因此本试验给药5 d,卡马西平可达稳态,所得谷浓度能较为准确地反映其体内状态。

  综上所述,在卡马西平治疗基础上添加黄连,抗癫痫作用优于单用卡马西平,这意味着在临床上可以考虑通过卡马西平联用黄连的方式,使癫痫患者得到更有效的治疗,而且在保证疗效的同时可以减少全身用药量,减少药物不良反应的产生。但在推广临床应用前,仍有问题尚待探讨,如其机制可能涉及黄连与P-gp 竞争性结合或降低脑内P-gp 的含量,其安全用药范围需依据黄连抗癫痫的效价强度及毒性等药理学指标等等,本研究小组将对此展开进一步研究。。

最近相关

最新更新

热门推荐

[民商法]劳动债权人破产程序参与权利研究
劳动债权概念是在修改破产法的过程中出现的。2004 年,贾志杰在十届人大常委会第十一次会议所作的《关于 企业破产法草案...[全文]
[民商法]免责的债务承担的协议的效力问题探讨
我国目前对免责的债务承担的协议的效力研究尚存不足之处,就债务承担而言,分为免责的债务承担与并存的债务承担两部分...[全文]
[临床医学]谈谈非语言沟通在临床重症患者护理工作中作用
沟通是人与人之间交流的主要方式,包括非语言沟通与语言沟通,针对普通患者,护理人员采用语言沟通方式向其传递和交流...[全文]
[临床医学]对于腹腔镜胆囊切除术并发胆漏的预防及护理
由于该术式具有损伤小、恢复快的特点,因此,腹腔镜胆囊切除术在临床工作中得到了普遍应用。即使具有较多优点,但易造...[全文]
[化学化工]关于有机化学实验双语教学中的问题探讨
中华人民共和国教育部在2001年《关于加强高等学校本科教学工作提高教学质量的若干意见》文件中明确指出:为适应经济全...[全文]
[化学化工]浅谈新的液质联用技术在生物大分子药物中的应用进展
从1969 年Talroze 等首次提出了液相色谱-质谱联用技术( LC-MS)至今已有40 多年的历史。液质联用主要基于质谱技术的发展和适合...[全文]
[药学]深究RDP多肽修饰的姜黄素隐形脂质的作用 
治疗脑内疾病的必要途径需将药物靶向性输送入脑内。以脑靶向性的蛋白或多肽作为载体,可能会实现药物的脑靶向转运。我...[全文]
[医学]研究结核分枝杆菌中自噬的作用
从酵母菌到人类,自噬是一种广泛存在的生物代谢过程。早期认为,自噬是宿主细胞在饥饿条件下通过降解受损或衰老的细胞...[全文]
[中国通史]比较清朝的几位状元
小时候,无论是听战鼓书还是听大戏,亦或是听老年人讲故事,只要一说到赶考的落难公子,一准就能中上状元。其实,在现...[全文]
[中国通史]看看古代官员怎样学习
古代官员普遍好读书,大多自幼读经、史、子、集,经过若干年的训练,入仕时方能知晓为人处世之理和感悟治乱兴衰之道。...[全文]
[世界历史]论战时日本报界视野下的女性动员
1938年2月,陆军省向国会提交了旨在强化战时体制的《国家总动员法》,由此揭开了国家总动员的序幕。国家总动员的目的是...[全文]
[哲学]浅析陈望衡环境美学体系的内在逻辑
自工业社会以来,自然环境遭到严重破坏。上个世纪后期,人类的环境意识逐渐觉醒,环境哲学兴起,与之相关,环境美学蓬...[全文]

热门标签